【产品名称】

通用名称：犬源性成分（Canine）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

Name：Canine derived ingredients Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】10T/盒     

【预期用途】

在动物产品原料和加工产品中，经常出现成分的掺假造假和无意污染现象，为确保加工产品的真实性，国内外研究人员建立了犬源性成分的检测方法。

本试剂盒适用于动物组织以及食品、饲料等样本中犬源性成分的检测。

【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对犬源性成分基因保守区特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对犬源性成分基因保守区的DNA进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。

【适用仪器】ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】取动物组织及其制品、食品或饲料约1g。

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

取动物组织及其制品、食品或饲料约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

推荐采用广州维伯鑫生物科技股份有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。

4.3 推荐循环参数设置：

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1]国家质量监督检验检验总局. GB/T 21105-2007 动物源性饲料中狗源性成分定性检测方法-PCR方方法[S]. 北京:中国标准出版社, 2007.

[2]国家质量监督检验检验总局. SB/T 10923-2012 肉及肉制品中动物源性成分的测定 实时荧光PCR法[S]. 北京:中国标准出版社, 2012.

[3]熊蕊, 郭凤柳, 刘晓慧. 肉制品中犬源性成分PCR检测方法的建立[J]. 动物医学进展, 2014.

【生产企业】

企业名称：广州维伯鑫生物科技股份有限公司 邮 编：510663

生产地址：广州高新技术产业开发区科学城科丰路31号G11栋201号

电子邮箱：info@vipotion.com 电 话：020-66377266

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