科研服务

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甲基化实验

相关知识:

DNA甲基化是最早发现的DNA修饰途径之一,大量研究表明,DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鸟嘌呤(7-mG)。结构基因含有很多CpG结构,2CpG和2GpC中两个胞嘧啶的5位碳原子通常被甲基化,且两个甲基集团在DNA双链大沟中呈特定三维结构。基因组中60%~ 90%的CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇地组成CpG岛,位于结构基因启动子的核心序列和转录起始点。DNA的甲基化修饰是基因表达调控的一种重要手段。

服务内容:

主要检测方法及原理:

亚硫酸氢钠测序法   Bisulfite Genomic Sequencing PCR,BSP

       亚硫酸氢钠测序法是建立在MSP基础上进一步深入研究CpG岛各个位点甲基化情况的方法。重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后,对PCR产物进行测序,并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。

BSP检测流程图

技术优势:此方法一种可靠性及精确度很高的方法,能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。在寻找有意义的关键性CpG位点上,有其他方法无法比拟的优点。限制性:每次至多能够检测450 bp内的基因甲基化状态。

甲基化特异性的PCR   Methylation Specific PCR,MSP

甲基化特异性是一种特异位点甲基化检测技术。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。因此从理论上讲,用不同的引物做PCR,即可检测出这种差异,从而确定基因有无CpG岛甲基化。

MSP检测流程图

 

MSP检测结果

 技术优势:

        这是检测基因甲基化的经典方法,是一种简便的、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方法。可以用于高通量样品基因特异位点甲基化的检测。限制性:因采用甲基化特异性引物进行PCR,该方法一次只能检测一个位点。

样品准备条件:

细胞样品:收集细胞后放入液氮中速冻保存或速冻24 h后转入-80 °C冰箱保存。

组织样品:动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存,液氮冻存24 h后可转入-80 °C冰箱保存。特殊组织(植物等)建议直接进行甲基化检测实验。

所有样品的处理和保存过程中,切忌反复冻融。

样品运输条件:样品运输条件根据实验样品的处理条件,可以选择液氮或者干冰运输。

您只需提供:

新鲜且足量的样品(组织不少于50 mg,细胞不少于107,全血不少于500 μl),或纯化好的符合实验要求的DNA≥ 5 μg/样),检测的基因信息,相关文献等。

我们提供:

实验报告单,MSP电泳图/BSP测序图等。

应用范畴:

  • 基因
  • 细胞
  • 微生物
  • 药物

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