【产品名称】

通用名称：犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

Name：Canine Parvovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）

【包装规格】10T/盒       

【预期用途】

犬细小病毒（Canine Parvovirus, CPV）可引起犬的剧烈呕吐、出血性肠炎、脱水、白细胞减少和心肌炎等症状。临床上犬细小病毒病可分为肠炎型和心肌炎型，对犬造成很大危害。CPV有3种亚型，主要是在VP2蛋白上有基因差异，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c^[1]。感染CPV的犬主要通过粪便向外排毒，因此粪便是犬间传递感染的主要传染源。CPV常规检测方法主要有病毒分离鉴定、血凝和血凝抑制试验、ELISA和PCR等方法。PCR法灵敏度高、特异性强、操作简单，已被广泛用于CPV诊断[^2-3]。

本试剂盒适用于检测样本中的犬细小病毒，用于犬细小病毒感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对犬细小病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对犬细小病毒的DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。

【适用仪器】ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】病死犬可采集淋巴结、脾、肺、等组织；活犬可采集血液、血清、粪便等。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；咽拭子样品直接取100μL于1.5mL灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

推荐采用广州维伯鑫生物科技股份有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。

4.3 推荐循环参数设置：

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1] Wang S J, Yang S T, Cheng C F, et al. Isolation and identification of canine parvovirus and sequence analysis of its VP2 gene [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2009, 10, 26.

[2]李英俊, 史利军, 李刚, 等. 犬细小病毒荧光定量PCR检测方法的建立与评价[J]. 中国兽医学报, 2010, 30(12): 1594-1597.

[3]刘海防, 胡传伟, 谢之景, 等. 犬细小病毒Taqman荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国兽医学报, 2010, 29(1): 36-40

[4]国家质量监督检验检疫总局. GB/T 27533-2011 犬细小诊断技术[S].

【生产企业】

企业名称：广州维伯鑫生物科技股份有限公司 邮 编：510663

生产地址：广州高新技术产业开发区科学城科丰路31号G11栋201号

电子邮箱：info@vipotion.com 电 话：020-66377266

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