“大风起兮云飞扬，苍天佑我效率强”，以前上学的时候，每每提取RNA之前，都要默念几遍（我太难了）。RNA提取怕是所有分子实验室的必备的技能了，但是提取的效果可能经常会有些不尽人意，忽好忽坏。

今天我们就来说说提取RNA被降解的那些事儿。

RNA样品特别容易受到环境因素影响，组织取出后没有马上处理或冷冻；待提取rna的样品没有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃；细胞在用胰酶处理时过度；溶液或离心管未经Rnase去除处理，这些都会导致辛苦提出的RNA被降解，特别是大名鼎鼎的RNA酶 （RNase），通常我们全副武装、小心翼翼，但还是会受到RNA酶的降解，核糖核酸酶（RNase）或称RNA酶，是一种可将RNA水解成小分子组成的核酸酶。RNase作为一个小分子的蛋白，却异常的稳定。常规的高温高压蒸汽灭菌和蛋白抑制剂都不能使它完全失活，听着就很顽固。

除了具有极佳的稳定性，RNA酶在实验室无处不在。它是生物的一种防御机制，对于一个细胞来说外源性的RNA往往是致命的，相比于外源性的DNA，外源性的RNA往往更加危险，一不注意外源性的RNA就愉快的转录翻译了，所以几乎所有的生物都进化出了RNA酶用来防御外源性RNA的入侵。因此实验室培养的细菌细胞以及提取RNA的你都散发着RNA酶的香气，人类的体液（唾液、眼泪等）甚至手指中都含有大量的RNA酶，所以操作时要戴好口罩，尽量避免与人交谈，还要做到勤换手套。

其次，操作时使用的仪器、耗材，包括枪头、离心管、移液器也要确保是无RNA酶的，刚刚说了单纯的灭菌是不能灭活RNase的，所以枪头和离心管要用DEPC处理，也就是说使用表明是DEPC处理的产品。移液器最好是有一套专用的，使用之前用75%的酒精擦拭干净，尤其是杆子。使用的水、缓冲剂要确保无RNA酶，使用的实验台面最起码要用75%的酒精擦拭，反正就是你实验过程中所用到的各种仪器设备，你都要对它了如指掌。

样本选择时一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理（液氮速冻）；样本出现多次反复冻融后，RNA得率会严重下降，也会导致RNA降解；对于血液样本，如果样本中含有血块，说明样本收集时未加入血液抗凝剂；建议重新收集样本并加入EDTA，肝素，柠檬酸等抗凝剂；

最后归纳一下：低温是关键，耗材处理好，全副武装少说话！

祝大家提的RNA浓度高，纯度好，实验顺顺利利。